رنگ آمیزی گرم استافیلوکوکوس( سواپ بینی)یک قطره آب بینی یا دهان در یک قطره آب روی لام به صورت یک لایه نازک در می آوریم لام را در هوا خشک می کنیم و بعد برای Fix کردن( ثابت کردن) لکه، لام را روی شعله عبور می دهیم

به طوریکه لام روی پشت دست نسوزد. بعد لام رادر رنگ کریستال ویولت می گذلریم به مدت 30 ثانیه تا

یک دقیقه نگه

می
میداریم و بعد با جریان آب معمولی شستشو داده( 1دقیقه) و بعد محلول لوگل به مدت یک دقیقه می ریزیم

گه می داریم..

لوگل برای ثابت کردن کریستال ویولت روی غشاء سلولی است. بعد با جریان آب شستشو داده بعد 20 ثانیه الکل 96% می ریزیم بعد محلول سافرانین یا فوشین می ریزیم. باکتری گرم مثبت در غشاء آن چربی وجود ندارد یا کریستال ویولت رنگ بنفش به خود می گیرد ولی باکتری گرم منفی چون در غشاء چربی دارد در نتیجه رنگ سافرانین( قرمز رنگ) به خود می گیرد.

چون غشاء گرم مثبت چربی ندارد الکل آن را زایل می کند و با کریستال ویولت رنگ بنفش به خود می گیرد.تمام باکتریهای کوکسی ها گرم مثبت هستند.

شمارش کل باکتری ها در مواد غذایی Total count
تعداد کل میکروبها در ماده غذایی در هر گرم یا هرCC(میلی لیتر) چقدر است چون هر ماده غذایی از نظر توتال کیفیت یک استاندارد دارد. فرضاً توتال کنت در مرغ یا گوشت یخ زده نباید از 107باکتری در هر گرم بیشتر باشد. حداکثر تا اینقدر مجاز است.
بهترین روش برای شمارش کل باکتری ها در ماده غذایی( توتال کنت)Pour Plate است که به نام Tryptone glucose yeast extraet Agar ( تریپتون گلوکز یست اکسترکت آگار) که یک نام دیگر به نامStandard methods Agar (SMA) معروف است.
می خواهیم بدانیم در همبرگر پخته نشده، سرخ کرده ، گوشت مرغ، شیر خشک ئعداد کل باکتری در هر گرم چقدر است.روش برای همه آنها یکی است و صادق است.

در مورد روش گوشت مرغ:
10 گرم گوشت مرغ به 90 سی سی سرم فیزیولوژی اضافه می شود و در بلندر Blender مخلوط کن ماده یکنواخت بدست می آوریم رقت حاصله 10/1 است.

از رقت 10/1، یک میلی لیتر بر می داریم و در پلیت محتوی 9 سی سی سرم فیزیولوژی می ریزیم
رقت 10/1 بدست می آید.

از رقت 100/1 حاصله 1 سی سی بر می داریم و

در لوله( پلیت) حاوی 9 سی سی سرم می ریزیم رقت 1000/1 و همینطور بعد رقت 10000/1 و
بعد رقت 100000/1 و 1000000/1 بدست می آوریم.
بعد از هر کدام یک از رقتهای حاصله، جداگانه یک CC بر می داریم و در پلیت خالی می ریزیم و بعد 20-25 سی سی اگار 45-50 درجه قبل از بسته شدن یا ژله ای شدن روی هر پلیت می ریزیم تا سطح پلیت

را بپوشاند و بعد حرکت زیگزاگی به پلیت ها می دهیم یعنی 3 دفعه به طرف راست می چرخانیم و 3 دفعه به طرف چپ و3
دفعه به طرف وسط حرکت می دهیم تا خوب نمونه در قسمت تحتانی پلیت پخش شود

بعد وقتی پلت ها بسته شد در انکوباتور می گذاریم و بعد از 48-24 ساعت بیرون آورده و شمارش کلنی می کنیم.
اگر 5 کلنی در رقت 10/1 باشد یعنی 50 کلنی در هر گرم ماده غذایی وجود دارد پلیت هایی که حاوی حداکثر 300 کلنی هستند شمرده می شوند.

اگر در رقت 10/1، 50 تا کلنی باشد در پلیت با رقت 100/1 باید 5 تا کلنی باشد و در رقت100/1 باید5/0 کلنی باید باشد یعنی هیچ کلنی نیست و شمارش نمی شود زیرا در هرسه رقت اگر حساب شود که در یک گرم یا یک سی سی نمونه چقدر کلنی است اینطور حساب می شود.
در رقت 10/1 ________ 500=10× 50در رقت100/1_______ 500=100× 5در رقت 1000/1_______500=1000× 5/0

اگر تعداد کلنی ها در پلیت ها به هم نزدیک باشد اشکال ندارد و اگر از هم فاصله زیاد داشته باشند باید معدل حساب کنیم

تا خطا کمتر باشد( بهترین شمارش کلنی ها40-18) مثلاً اگر 50 تا کلنی در رقت 10/1 باشد و 15 تا کلنی در رقت 100/1 باشد اینطور حساب می شود و
معدل گیری می شود.500=10×501500=100×152250=2÷4500=1500+500

حد متوسط آنها (تعداد کلنی )


طریقه شمارش کلیفرم ها در مواد غذایی( شیر):
برای شمارش کلنیوم ها از ماده ای به نام Maccon Key Agar استفاده می شود برای این کار 3 پلیت که هر کدام حاوی cc9 سرم فیزیولوژی است در نظر می گیریم. یک سی سی از شیر به پلیت حاوی cc9 سرم فیزیولوژیک می ریزیم تا رقت 10/1 بدست آید و بعد cc1 از رقت100/1 بر می داریم و به پلت حاوی cc1 سرم می ریزیم تا رقت 1000/1 بدست آید . بعد cc1 از رقت 10/1 و cc1 از رقت100/1 cc,1 از

رقت 1000/1 جداگانه در 3 پلیت یا پتری دیش می ریزیم
بعد روی هر کدام از پلیتها یا پتری دیش ها آگار Maccon key ریخته و حرکت زیگزاگی و دورانی داده تا آگار بسته شود و بعد یک قشری از آگار روی هر کدام می ریزیم تا سطح پلیت ها را بپوشاند برای اینکه از آلودگی ثانویه جلوگیری شود وقتی آگارها بسته شددر انکوباتور 37 درجه به مدت 24 ساعت می گذاریم. کلنی های قرمز و صورتی کلیفرم ها هستند و اگر سالمونلا باشد بیرنگ است.